- 品名： 白鯊Biosharp BL779A Fura-2 AM (鈣離子熒光探針, 2mM)
- 型號： BL779A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品簡介：
Fura-2 AM是常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一，其在進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fura-2，Fura-2特異性地結(jié)合Ca2+并發(fā)出熒光，結(jié)合Ca2+后的最大激發(fā)波長從結(jié)合前的380 nm向340 nm偏移，其發(fā)射熒光強(qiáng)度與結(jié)合Ca2+的濃度存在定量關(guān)系。一般用340nm和380nm波長激發(fā)Fura-2，通過使用與兩種激發(fā)對應(yīng)的熒光強(qiáng)度比率來計(jì)算細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，這種比率測量方法可以消除不同細(xì)胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細(xì)胞厚度差異等一些誤差因素。
本產(chǎn)品是配制于無水DMSO中的儲存液，濃度為2mM。
使用方法（僅供參考）：
一、試劑準(zhǔn)備：
1．配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末中加入0.5ml DMSO配制成20%(w/v) Pluronic F-127母液。溶解時需要在40-50℃加熱20-30min。室溫保存，如果有結(jié)晶析出，重新加熱即可溶解，不影響使用。
二、熒光標(biāo)記：
1．Fura-2 AM工作液的配制：用HBSS稀釋Fura-2 AM溶液，制備1-5μM的Fura-2 AM工作液。可以加入Pluronic F-127防止 Fura-2 AM在緩沖液中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞，Pluronic F-127的工作濃度是0.02%（1:1000 稀釋母液）。
注：工作液現(xiàn)配現(xiàn)用；具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基
礎(chǔ)上盡量使用最低探針濃度。
2．對于待檢測的培養(yǎng)細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。
3．將Fura-2 AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)15-60 min，然后除去Fura-2 AM工作液。
注：如果是首次實(shí)驗(yàn)不能確定孵育條件，建議先嘗試 37℃孵育30分鐘，觀察熒光效果。如果細(xì)胞死亡較多，則適當(dāng)縮短時間；
如果熒光強(qiáng)度太弱，則適當(dāng)延長時間。
4．用緩沖液洗滌細(xì)胞3次，以充分去除殘留的Fura-2 AM工作液。
5．加入緩沖液覆蓋細(xì)胞，37℃孵育約20-30 min，以確保AM體在細(xì)胞內(nèi)的完全去酯化作用。
6．激光共聚焦顯微鏡等熒光檢測儀器觀察和檢測細(xì)胞。
注意事項(xiàng)：
1、本產(chǎn)品在4oC、冰浴等較低溫度下可能會凝固而粘在管底、管壁或管蓋，可以20-25oC水浴溫育片刻至全部融解后使用。
2、熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
保存條件：
-20℃避光保存，半年有效，避免反復(fù)凍融。
