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| ■ 制品內(nèi)容 (25 μl反應(yīng)×120次量、 各20次×6種) |
| 2X CycleavePCR Reaction Mix (2×conc.)750 μl×2（120 次）Primer·Probe Mix-1 (for beef) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-2 (for pork) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-3 (for chicken) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-4 (for rabbit) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-5 (for horse meat) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-6 (for mutton) (5X conc.)*1100 μl（20 次）dH2O1 mlControl DNA for beef*250 μl（10 次）Control DNA for pork*250 μl（10 次）Control DNA for chicken*250 μl（10 次）Control DNA for rabbit*250 μl（10 次）Control DNA for horse meat*250 μl（10 次）Control DNA for mutton*250 μl（10 次） *1 含有熒光標記探針，要注意避光。。*2 Control DNA為確認反應(yīng)性能的陽性對照，濃度約為 2 ng/μl。 Limited Use Label License: [M40], [M46], [L4] |
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| ■ 制品說明 |
| CycleavePCR 肉種鑒定Kit (6種) 是以線粒體DNA上Cytochrome C oxidase Subunit I (COX I) 基因區(qū)域的動物物種間多態(tài)性為基礎(chǔ)，對牛、豬、雞、馬、羊、兔6種肉類進行鑒定，使用Thermal Cycler Dice Real Time System II等Real Time PCR專用儀器進行擴增檢測。PCR法是以微量的DNA為模板，對目的基因進行特異性擴增的技術(shù)。由DNA熱變性、引物退火、DNA聚合酶作用下引物的延伸三個步驟循環(huán)往復(fù)，可以在短時間內(nèi)擴增DNA達100萬倍以上。使用Real Time PCR專用擴增儀可對擴增產(chǎn)物進行實時監(jiān)測。本制品中的DNA聚合酶采用了Hot Start PCR專用酶Takara Ex Taq HS，可以在更短時間內(nèi)進行高靈敏度的檢出，并能有效防止在熱循環(huán)前由引物錯配或引物二聚體產(chǎn)生的非特異性擴增。Kit中使用了COX I 區(qū)域設(shè)計的特異性引物，對各動物物種進行特異性擴增，并使用與各物種擴增產(chǎn)物特異性結(jié)合的探針進行檢測。該檢測使用了Cycling Probe法，Cycling Probe法是由RNA和DNA構(gòu)成的雜合探針與RNase H組合使用的高靈敏度檢出法，能夠高效率地檢出擴增過程中及擴增結(jié)束時的目的基因片段。Cycling Probe內(nèi)部含有RNA堿基，一端標記熒光物質(zhì)，另一端標記熒光淬滅物質(zhì)，當探針處于完整狀態(tài)時，由于熒光淬滅作用抑制熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，但當探針與擴增產(chǎn)物中的互補序列雜交后，RNase H在RNA部分將探針切斷，淬滅抑制作用解除，熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，通過測定熒光強度，能夠?qū)崟r監(jiān)控擴增產(chǎn)物量。制品中目的基因檢測用探針使用了FAM標記，內(nèi)參照檢測用探針使用了ROX標記，在同一反應(yīng)管內(nèi)對目的基因及內(nèi)參照 (Internal Control) 同時進行擴增，通過兩種不同熒光標記探針可以對目的基因和內(nèi)參基因同時檢定，實現(xiàn)雙通道同步檢測。其中，對內(nèi)參照反應(yīng)的檢測，可以監(jiān)控反應(yīng)是否正常進行，防止假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。使用Real Time PCR進行檢測，無需電泳便可迅速判定結(jié)果 (約80 min) 。 本制品中含有確認PCR擴增反應(yīng)是否正常的陽性對照用模板、引物和檢出用探針，可確認反應(yīng)液中有無PCR阻害物。 ■ 保存-20℃。 ■ 操作注意1. Real Time PCR儀的使用請按照說明書進行。2. 如果探針、引物因混入核酸酶而被降解，則不能準確檢測。實驗者的汗液和唾液也可能會帶入核酸酶，操作中應(yīng)注意。3. 建議從反應(yīng)液的配制到檢測樣品的添加，設(shè)定以下3個實驗區(qū)域，并進行物理性隔離（參考“補充：關(guān)于區(qū)域劃分”）。在各區(qū)域要避免開閉含有擴增產(chǎn)物的反應(yīng)管。區(qū)域1：反應(yīng)液的配制及分裝。區(qū)域2：檢測樣品的制備。區(qū)域3：向反應(yīng)液中添加檢測樣品，進行反應(yīng)、檢出。由于本Kit使用了Real Time PCR的方法，擴增反應(yīng)與檢測同時進行，反應(yīng)后的擴增產(chǎn)物無需進行電泳。另外，為了避免污染，嚴禁從Tube中取出擴增產(chǎn)物。 |
